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饲料中泛酸的测定

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饲料中泛酸的测定

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1  仪器及试剂

1.1仪 器

1). 分析天平一台(精度0.1mg);

2). 超声波水浴一台;

3). 容量瓶;

4). 微量进样器(5ul或10μl)一支;

5). 微量可调移液枪(1000ul)一支、吸头多个;

6). 旋涡混匀器一台;

7). 离心机一台;

8). pH计一台

9). LC-10Tvp高效液相色谱仪;

1.2试 剂

1). 0.1%的磷酸溶液;

2). 1%的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液

3). 磷酸缓冲液

4). 1mol/L的盐酸溶液

5). 1mol/L的氢氧化钠溶液

6). 泛酸钙标准品:含量≥99%

7). 泛酸钙标准贮备液

8). 泛酸钙标准工作液

1.3标准溶液配制

泛酸标准贮备液:准确称取已知浓度的泛酸钙标准品0.02g,置于100ml棕色容量瓶中,用0.1%的磷酸溶解,定容至刻度,摇匀。

泛酸标准工作液液:准确吸取泛酸标准贮备液用水按1:10的比例稀释,现用现配。该溶液浓度为20μg/ml。

磷酸缓冲液:称取3.12 g 二水磷酸二氢钠溶于1L水中,用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为5.5,通过0.45滤膜过滤脱气使用。

2  样品制备

2.1复合预混合饲料:称取试样1-2g 或维生素预混合饲料0.25 -0.5g,精确至0.0001g,置于100 mL棕色容量瓶中。加60 mL水浸湿,摇匀,加10mL l%的二乙胺四乙酸二钠溶液混匀,置于超声波水浴上振荡提取15min。用水定容至刻度混合均匀,过滤或离心。再经0.45μm滤膜过滤,调整溶液的浓度大于1μg/mL,进样测定。

2.2浓缩饲料:称取试样2-5g ,精确至0.00 01g,置于100ml色容量瓶中。加60ml浸湿,摇匀,加10ml l%二乙胺四乙酸二钠溶液棍匀,置于超声波水浴上振荡提取15 min。提取液若出现混浊,需用几滴氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节pH至4.5左右,至溶液澄清(用试纸显示)沉淀蛋白质,用水定容至刻度,过滤或离心。再经0.45μm滤膜过滤,进样测定。

3  色谱条件

色谱柱:Vertex C18色谱柱 150mm×4.6mm×5μm;

流动相:磷酸缓冲溶液;

流速:1.0ml/min;

温度:室温;

进样量:20μL;

检测波长:200nm。

4  色谱图

饲料泛酸.jpg

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